DN-TNFα及二硫键缺失的生物学活性研究和对大鼠关节炎治疗的探讨
目的：对DN-TNFα的生物学活性以及二硫键在TNFα中的作用进行了研究，并探讨了DN-TNFα对CIA大鼠关节炎的治疗效果。 方法：用重叠延伸PCR法对TNFα引入点突变，以pET-28a为载体构建了Native TNFα、二硫键缺失TNFα(C69L，、C69S)和DN-TNFα(A145R/Y87H)四种蛋白的重组质粒，转化E.coli BL-21，IPTG诱导蛋白表达，表达产物经离子交换柱层析(CM柱/DEAE柱)进行分离纯化，并通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定得到四种目的蛋白。对Native TNFα和突变TNFα四种蛋白进行了细胞毒性、细胞凋亡和NF-κB信号传导一系列体外实验，以及在大鼠CIA模型中使用DN-TNFα和PEG修饰的DN-TNFα进行治疗，研究二硫键缺失对TNFα生物学活性的影响，以及DN-TNFα的生物学功能和对大鼠CIA的治疗效果。 结果：二硫键缺失TNFα在细胞杀伤以及诱导NFKB信号传导方面与Native TNFα的生物学活性相当，但DN-TNFα的细胞毒性和NFκB信号传导都表现出极低的生物学活性。在大鼠CIA关节炎发病的起始阶段，DN-TNFα通过抑制TNFα的生物活性，阻断其下游信号传导，有效地控制了关节炎发生发展，但在症状稳定期其治疗效果并不明显。 结论：二硫键并不是维持TNFα结构和功能的关键因素，可以利用TNFα的巯基进行PEG化学修饰;DN-TNFα具有极低的生物学活性，在体内能够抑制Native TNFα的活性，缓解初期关节炎的发生发展，具有成为一种新型的以TNFα为靶向的抗炎症治疗药物的潜力。
风湿性关节炎 聚乙二醇 生物学活性 二硫键缺失 离子交换柱层析 细胞毒性 动物模型
陈程 楼觉人
上海生物制品研究所研发部，上海 200052
国内会议
兰州
中文
225-237
2009-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）