人血液循环DNA实时荧光定量PCR检测分析研究
目的：建立含内参照物的血液循环DNA实时荧光定量PCR检测方法,检测并确定健康人群血液循环DNA含量。 方法：构建重组质粒,作为内参照物,采用双重实时荧光定量PCR技术同时扩增血浆和血清中人看家基因β-actin和重组质粒中人工合成DNA序列,以内参照物浓度计算β-actin基因浓度；对该方法的敏感性、准确性和重复性进行评价:定量检测155例健康成年人血浆和血清中DNA含量。 结果：该方法最低可对2μl血浆或血清样本进行定量测定；血浆DNA定量检测结果与紫外分光光度法比较,检测差异在20％以下,血清检测差异在30％以下；该定量检测方法的批内差异为11％,批间差异为17％；β-actin基因平均扩增效率分别为99.8％,重组质粒DNA的平均扩增效率为90.1％；155例健康人血浆DNA中值水平为37 ng/ml,显著低于血清DNA中值水平293 ng/ml(P＜0.01)；健康成年男性血浆DNA含量高于女性(P=0.045)。健康成年男性血浆DNA含量正常值范围为不超过110 ng/ml,女性为不超过100 ng/ml,血清DNA含量正常值范围为不超过1.2 μg/ml。 结论：建立了含有内参照物的人血液循环DNA定量检测新方法,该方法敏感性和准确性高,重复性好,初步确定了健康人循环DNA的正常参考值范围.血浆样本比血清样本更适合用于血液循环DNA定量检测。
循环DNA 实时荧光定量PCR 双重PCR 血液循环 血清检测
潘世扬
南京医科大学第一附属医院临床检验中心
国内会议
南宁
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19-23
2007-09-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）